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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®是一種功能強(qiáng)大、用途廣泛的DNA和siRNA轉(zhuǎn)染試劑，用于日常實(shí)驗(yàn)，可產(chǎn)生高效可靠的科學(xué)結(jié)果。jetPRIME®確保在各種粘附細(xì)胞中具有高的DNA轉(zhuǎn)染效率和優(yōu)異的基因沉默。jetPRIME®也是DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染或幾種質(zhì)粒共遞送的理想選擇。此外，jetPRIME®試劑對(duì)細(xì)胞非常溫和，因?yàn)樗谵D(zhuǎn)染過程中需要少量的試劑和核酸。
polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用方向多樣，主要的應(yīng)用方向如下：
一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
jetPRIME®導(dǎo)致不同來源的轉(zhuǎn)染粘附細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的百分比非常高，如下表：
細(xì)胞類型 | 細(xì)胞系 | 描述 | 轉(zhuǎn)染效率 |
上皮細(xì)胞 | B16-F10 | 小鼠黑色素瘤 | 70-80% |
BNL-CI2 | 小鼠正常胚胎肝細(xì)胞 | 50-60% | |
CaCO2 | 人結(jié)腸癌上皮 | 20% | |
CHO-K1 | 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢 | 70% | |
HCT-116 | 人結(jié)腸癌 | 70% | |
Hela | 人宮頸上皮樣癌 | 70-90% | |
Hepg2 | 人肝癌 | 50-70% | |
Huh-7 | 人肝癌 | 30-50% | |
MCF-7 | 人乳腺腺癌 | 50% | |
MCF-10A | 人乳腺腺癌 | 40-50% | |
MDCK | 犬腎上皮 | 20% | |
PC-3 | 人類前列腺癌 | 70% | |
Vero | 非洲綠猴腎 | 50% | |
成纖維細(xì)胞 | COS-7 | 非洲綠猴腎 | 60-80% |
HEK-293 | 人胚腎成纖維細(xì)胞 | 80-90% | |
MRC-5 | 人胚肺成纖維細(xì)胞 | 50% | |
NIH-373 | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | 50-70% | |
成髓細(xì)胞 | Raw 264.7 | 小鼠單核巨噬細(xì)胞 | 40-50% |
成肌細(xì)胞 | C2C12 | 鼠成肌細(xì)胞 | 70-90% |
神經(jīng)元 | SH-SY5Y | 人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤 | 70-80% |
原發(fā)性肝細(xì)胞 | 人原代肝細(xì)胞 | 20-30% | |
原發(fā)性黑色素細(xì)胞 | 人原代黑素細(xì)胞 | 40-50% | |
表1：使用jetPRIME®的各種細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)通過FACS分析測(cè)定GFP陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。
質(zhì)粒是常見于細(xì)菌中的環(huán)狀DNA小分子。質(zhì)粒與染色體DNA分開存在和復(fù)制，在細(xì)菌中，質(zhì)粒通常攜帶有利于細(xì)菌生存的基因。質(zhì)?？梢员挥幸獾匾胨璧募?xì)胞中，并用于在特定細(xì)胞系中過表達(dá)感興趣的基因。這一過程被稱為DNA轉(zhuǎn)染，是研究感興趣的基因功能或蛋白質(zhì)的常用方法。
二、基因編輯
CRISPR/Cas9系統(tǒng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的使用最近已經(jīng)成為在特定基因座修飾細(xì)胞基因組的一種非常方便的方法。它涉及將（a）編碼Cas9的一個(gè)或多個(gè)質(zhì)粒、特異性gRNA和最終要插入的序列，或（b）一個(gè)或兩個(gè)質(zhì)粒和RNA分子（gRNA）的混合物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。
三、siRNA轉(zhuǎn)染
jetPRIME®可使多種細(xì)胞系的內(nèi)源性基因表達(dá)降低90%以上。例如，jetPRIME®介導(dǎo)的用靶向HeLa細(xì)胞中內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的10nM siRNA雙鏈體轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，將層粘連蛋白/C基因表達(dá)顯著降低到幾乎無(wú)法檢測(cè)的水平。
圖1：使用jetPRIME®的內(nèi)源性層粘連蛋白A/C沉默。用10nM的21-mer層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。48小時(shí)后，使用抗層粘連蛋白A/C的抗體通過免疫熒光顯微鏡評(píng)估層粘連蛋白/C沉默。
四、不同核酸的共轉(zhuǎn)染
jetPRIME®非常適合DNA和siRNA/miRNA共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)或幾種DNA質(zhì)粒的共遞送，用jetPRIME®進(jìn)行了DNA和siRNA遞
送，并在各種毒性極低的細(xì)胞系中觀察到高效的基因沉默。使用10nM的siRNA，在貼壁細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了超過90%的沉默（圖2）。
圖2：使用jetPRIME®進(jìn)行DNA和siRNA共轉(zhuǎn)染后，幾種細(xì)胞系中的外源性螢光素酶沉默。在6孔板中用每孔400ng p4CMV Luc和10nM熒光素酶siRNA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
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