乳腺癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品說(shuō)明：乳腺癌類器官培養(yǎng)基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是一款促進(jìn)乳腺癌類器官體外形成和擴(kuò)增的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品為無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有維持目的細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物和生長(zhǎng)因子等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個(gè)合適的細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)人乳腺癌類器官的體外生長(zhǎng)和擴(kuò)增。

乳腺癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明：
?  實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
（1）提前將24孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃的培養(yǎng)箱中預(yù)熱過(guò)夜。
（2）將15mL無(wú)菌離心管、1.5mLEP管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30 min。
（3）提前30 min從4 ℃冰箱取出乳腺癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫。（4）提前從-20℃冰箱取出所需體積的細(xì)胞外基質(zhì)膠冰上融化。（5）配置含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基冰上預(yù)冷備用。
?  乳腺癌類器官培養(yǎng)
（1）將取自乳腺癌患者的樣本進(jìn)行分離和消化，消化后的細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。
（2）按每孔1~2×10*個(gè)細(xì)胞密度計(jì)算所需細(xì)胞數(shù)，根據(jù)計(jì)算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中，離心，棄上清，將細(xì)胞沉淀置于冰上。
（3）按1∶2體積比，將一份體積的含1%BSA的DMEM加入2份體積的的細(xì)胞外基質(zhì)膠（Corning#356231）中，輕輕混勻（全程冰上操作），然后在冰上將配好的基質(zhì)膠混合液與細(xì)胞沉淀充分混勻。
（4）將細(xì)胞沉淀與基質(zhì)膠的混合液按照35μL/孔滴在已提前預(yù)熱好的24孔板中央，使之形成圓頂狀膠滴。緩慢將細(xì)胞培養(yǎng)板移至培養(yǎng)箱至少30分鐘。
（5）待基質(zhì)膠*凝固，沿24孔壁緩慢加入1mL/孔預(yù)先恢復(fù)至室溫的本類器官培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)板置于37℃，5%CO2條件下靜置培養(yǎng)。
（6）鏡下觀察類器官形成情況，每3~4天更換一次培養(yǎng)基。
?  乳腺癌類器官收集
（1）棄去培養(yǎng)基，用基質(zhì)膠解離試劑潤(rùn)洗槍頭后，每孔加入1mL該試劑，靜置1min。
（2）用基質(zhì)膠解離試劑潤(rùn)洗槍頭后，吸取孔內(nèi)液體，輕輕吹打圓頂狀膠滴表面，將膠滴吹散，并將吹散后的含類器官的混合液收集至15 mL離心管中。
（3）重復(fù)一次上述操作，將兩次洗脫下來(lái)的類器官合并收集于同一15mL離心管中。
（4）37℃，75rpm水平搖床上解離10min（具體解離時(shí)間根據(jù)實(shí)際情況決定，以無(wú)明顯大塊膠狀物為準(zhǔn)）。
（5）10分鐘后在4℃下，300g，離心5min，小心吸棄上清，沉淀待用。
?  乳腺癌類器官傳代
（1）收集好的細(xì)胞沉淀（以無(wú)肉眼可見(jiàn)基質(zhì)膠狀沉淀為準(zhǔn)）加入預(yù)冷的含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基重懸，在4℃下，300g，離心5min。
（2）小心吸棄上清，沉淀用含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)。
（3）按照培養(yǎng)步驟操作，以大約1000個(gè)類器官/孔密度重新接種類器官，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
3.本產(chǎn)品中不含血清，含有抗生素，如無(wú)特別需要，不用額外添加血清和其他抗生素，可直接使用。
4.為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。5.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期后，將無(wú)法達(dá)到理想的使用效果。
6.乳腺組織樣本建議為腫瘤術(shù)中樣本，且腫瘤細(xì)胞比例越高（至少>50%），培養(yǎng)成功率越高，不推薦用于少量樣本（如穿刺或循環(huán)腫瘤細(xì)胞）的培養(yǎng)。
7.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。