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022-66387942你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎?有什么注意事項(xiàng)呢?讓我們一起來看看吧!
一、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法
1. 擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類型的緩沖液(TAE)結(jié)合起來,加熱使混合物融化,避免沸騰。
2. 選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子,為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔,以及容納每個(gè)待裝樣品數(shù)量的孔容量。
3. 膠凝固后,將凝膠放入電泳儀中,電泳液沒過凝膠,根據(jù)加入量的多少,決定混合多少ul的loding buffer,將樣液混合loding buffer用移液槍加入到凝膠中。
4. 蓋上蓋子,確保電極和蓋子的方向正確,注意正負(fù)極, 打開電泳儀 ,設(shè)定凝膠運(yùn)行的時(shí)間和電壓,根據(jù)樣品大小確定運(yùn)行時(shí)間。
二、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 瓊脂糖凝膠溶液配制時(shí)總液體量不宜超過錐型瓶50%容量。
2. 加熱時(shí)可以中途搖動(dòng)搖動(dòng),防止瓊脂糖凝膠凝在錐形瓶底部。
3. 注意不要損傷梳底部的凝膠。防止加樣時(shí)樣品漏出。
4. 凝膠濃度越低,分辨的片段越大;凝膠濃度越高,分辨的片段越小。
5. 使用紫外透射儀觀察,紫外光對(duì)DNA 分子有損傷作用,不可長(zhǎng)時(shí)間照射。從膠上回收DNA時(shí),應(yīng)盡量縮短光照時(shí)間以減少紫外光切割DNA。
6. 紫光燈下觀察時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)鏡,以免損傷眼睛。
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