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022-66387942Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質(zhì)的功能分子,由日本廣島大學(xué)大學(xué)院醫(yī)齒藥學(xué)綜合研究科醫(yī)學(xué)品分子機(jī)能科學(xué)研究室開(kāi)發(fā)。以Phos-tag™ 丙烯酰胺(Phos-tag™ Acrylamide)為首開(kāi)發(fā)的多種Phos-tag™ 產(chǎn)品被應(yīng)用于世界范圍內(nèi)的基礎(chǔ)研究,并且在GPCR通路及Wnt通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分析方面也取得了優(yōu)秀成果。
一、分離磷酸化蛋白
在制備SDS-PAGE預(yù)制膠過(guò)程中加入Phos-tag™ Acrylamide,即可根據(jù)磷酸化水平和磷酸化位點(diǎn)分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。
原理:
1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個(gè)二價(jià)金屬離子。
2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢。
3. 根據(jù)磷酸化水平進(jìn)行分離。(即使磷酸化位點(diǎn)的數(shù)目相同,但只要位置不同就能分離)
特點(diǎn):
可檢測(cè)市售抗磷酸化抗體無(wú)法檢測(cè)的磷酸化蛋白。
可檢測(cè)磷酸化水平及磷酸化位點(diǎn)。
可同時(shí)檢測(cè)磷酸化與非磷酸化
二、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
①α-casein去磷酸化反應(yīng)隨時(shí)間的變化
使用堿性磷酸酶隨時(shí)間(孵育時(shí)間:0-120 min)處理α-casein,并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常規(guī)SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。
② 野生型/突變型Noxa表達(dá)的MCL-1磷酸化水平變化
使野生型(wt)及突變型(3E,KR,5A)的Noxa在肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株H209細(xì)胞中表達(dá),并進(jìn)行細(xì)胞溶質(zhì)(Cytosol)組分和HM(Heavy Membrane,含線粒體較多)組分分離。通過(guò)Phos-tag™ SDS-PAGE分離出樣品中的MCL-1(40 kDa),使用抗MCL-1抗體進(jìn)行Western blotting檢測(cè)。
③二維電泳中的應(yīng)用: hnRNP K異構(gòu)體的磷酸化分析
●檢測(cè)磷酸化蛋白
Phos-tag™ Biotin
Phos-tag™ Biotin是Phos-tag™ 分子與生物素結(jié)合的產(chǎn)品,無(wú)需使用抗磷酸化抗體即可檢測(cè)與PVDF膜上的磷酸化蛋白。本產(chǎn)品進(jìn)需配合“HRP 結(jié)合親和素"進(jìn)行使用。
特點(diǎn)
1. 結(jié)合與磷酸化種類無(wú)關(guān)
2. 推薦用于檢測(cè)無(wú)合適的抗磷酸化抗體的蛋白
●Phos-tag™ 凝膠熒光染料
Phos-tag™ 凝膠熒光染料,是一種可在生理 pH 范圍內(nèi),對(duì)凝膠中的磷酸化蛋白進(jìn)行染色的熒光染料。進(jìn)行SDS-PAGE后,用本產(chǎn)品處理聚丙烯酰胺凝膠,可以對(duì)磷酸化蛋白進(jìn)行特異性染色。本系列有波長(zhǎng)不同的Yellow(黃)、Magenta(品紅)、Cyan(藍(lán)綠)、Aqua(淺綠)四種顏色。每管規(guī)格為0.2 mg,可對(duì)約20個(gè)迷你凝膠進(jìn)行染色。
使用Phos-tag™ 熒光凝膠染色,篩選組氨酸激酶抑制劑。結(jié)果表明,激酶抑制劑對(duì)磷酸化存在濃度依賴性抑制。
天津益元利康生物科技有限公司,代理Wako磷酸化蛋白分析用——Phos-tag™ 系列產(chǎn)品,歡迎選購(gòu)!